Helicobacteerilajien havaitsemiseen kehitetty tekniikka (2004) . Yhteyksiä maksa ja haimatauteihin havaittavissa. (Väitöskirja )

NILSSON Hans-Olof . Enteric Helicobacter and H.pylori in chronic inflammation and cancer of the hepatobiliary tract and pancreas. Lund University 2004.

 ISBN 91-628-6254-5.http://lup.lub.lu.se/record/467310

TIIVISTELMÄ:

TAUSTA: Helikobakteerisuku koostuu ainakin 26 lajista vuoden 2004 aikoihin ja uusia  lajeja oli arviossa. H.pylori  bakteeri vaikuttaa ihmisten terveyteen,, muta sen lisäksi on  runsasta tutkimusta kohdistettu muihinkin helikobakteerilajeihin, joita on ihmisistä ja eläimistä eristettyja joilla on merkitystä luonnollisissa taudeissa  subkliinisistä tulehduksista  gastrointestinaaliseen ja hepatobiliaariseen  syöpään asti. 

 

TARKOITUS: Tämän työn tarkoituksena  on ollut tutkia, esiintyykö ja  ihmisen maksassa ja sappitiepuustossa  mahalaukun H. pylori ja suoliston helikobakteerilajeja ja ovatko ne havaittavissa ja mikä on mahdollinen assosiaatio näitten mikrobien ja  ihmisen maksa ja haimasairauksien kesken. 

 

MENETELMÄ: Monet helikobakteerilajit ovat hyvin  vaikeita viljellä biologisista näytteistä. Sentakia asetettiin etusijalle PCR- havaitsemismetodit. PCR- metodiin ja nukleiinihappoihin perustuvat analyysit helikobakteerin havaitsemiseksi tuoreista tai formaliinilla fiksoiduista paraffiiniin upottamalla säilötyistä  ihmiskudosnäyteistä optimoitiin. Kehiteltiin eräs tekniikka (multiplex PCR-denaturating gradient gel/DNA sequencing tehnique) jolla pystytään tunnistamaan monia vaikeasti viljeltäviä tai ei-viljeltävissä olevia  mahalaukun ja suolen helikobakteereita ja menetelmä arvioitiin  laboratoriokoe-eläimillä  mahasuolikudoksista  ja erilaisin helikobakterilaaduin.

TULOKSET: Helikobakteerilajien DNA maksansiiräännäisnäytteistä (PSC, PBC , NCLC potilailta) sekä normaalista maksasta korreloivat vahvasti  krooniseen kolestaattisen maksatautiin. H-pylori ja Helicobacter lajien "maksaan" korreloivien geenien sekvenssejä havaittiin maksakudoksista niiltä potilailta, joilla oli maksasolu - ja sappitiehytkarsinooma,  kun taas maksakudokset  paksu ja peräsuolisyöpäpotilaiden  maksamestastaasien  leikkeistä löydökset olivat negatiiviset.

Lapset, joilla oli diagnosoitu erilaisia kroonisia maksatauteja, maksan toksista vauriota ja systeemisiä tauteja, olivat usein positiivisia Helikobakteerisuvulle.  16S rDNA-analyysi osoitti samankaltaisuutta H. pylorilajin ja suoliston H. ganmani lajin kesken. Kroonista maksasairautta potevillla lapsilla diagnosoitiin H. ganmani.

Havaittiin Helikobakteerilajien  liittyvän haimasyöpään, mutta niitä ei ollut havaittavissa  hyvänlaatuisissa haimataudeissa eikä histologissti normaalissa haimassa. 

Odottamaton löydös oli, että  mahalaukun näytteiden PCR-tuotteet  haimasyöpäpotilailta korreloivat  suolen H. bilis, H. hepaticus ja H. ganmani mikrobien sekvensseihin. 

 

YHTEENVETO: Kehitetty PCR-tekniikka jolla löytää  vaikeasti havaittavia helikobakteerilajeja ja  assosiaatioita  helikobakteerilajien ja ihmisen kroonisten maksa- ja haimatautien kesken.

 

Abstract

The Helicobacter genus now consists of at least 26 species, with additional novel species in the process of being validated. Beyond the impact of H. pylori and human health, considerable research has focused on other Helicobacter species isolated from humans and animals and the associated natural diseases that range from subclinical inflammation to cancer in the gastrointestinal and hepatobiliary tract.

 The aims of this study were to investigate whether gastric (H. pylori) and enteric Helicobacter species are present and detectable in the human biliary tree and liver and to explore a possible association between these microbes and human liver and pancreas disease.

 Several Helicobacter species are very difficult to culture from biological samples. Therefore, PCR-based detection methods were preferred. PCR- and nucleic acid-based analyses to detect Helicobacter in fresh as well as formalin-fixed paraffin embedded preserved human tissue specimen were optimised.

 A multiplex PCR-denaturating gradient gel/DNA-sequencing technique that allows identification of many fastidious and non-culturable gastric and enteric Helicobacter was developed and evaluated on gastrointestinal tissue of laboratory rodents, colonised by various Helicobacter species.

 The presence of Helicobacter species DNA in liver transplant specimen of patients with PSC, PBC, NCLC, and normal liver correlated strongly to chronic cholestatic liver disease. H. pylori and Helicobacter sp. ‘liver’-related gene sequences were also detected in liver tissue from patients with hepatocellular- and cholangiocarcinoma, whereas liver tissue from patients with resected liver metastases from colorectal cancers were negative. 

Children diagnosed with various chronic liver diseases, liver toxicity damage and systemic diseases were frequently positive for the genus Helicobacter. 16S rDNA analyses showed similarity to H. pylori and the enteric species H. ganmani. H. ganmani was detected in children with chronic liver diseases.

 Helicobacter species were found to be associated with pancreatic cancer, but was not detectable in samples of benign pancreatic diseases and histologically normal pancreas. Unexpectedly, PCR products from stomach specimen of pancreatic cancer patients were related to sequences of enteric H. bilis, H. hepaticus, and H. ganmani.

 In summary, this thesis explores PCR-based methodology to detect fastidious Helicobacter species and the association between Helicobacter species and human chronic liver and pancreatic diseases.